Celetrix Electroporation

全新高效细胞电转仪

Celetrix电转仪在CRISPR/Cas9基因编辑领域的应用

使用Celetrix电转方法,我们可以将RNP(Cas9蛋白和gRNA复合物)或者Cas9质粒导入细胞,进行高效基因编辑。

RNP电转对于细胞的毒性很小,基因敲除效率一般可以达到90%以上,可以适用于几乎所有的细胞种类。对于T细胞、NK细胞等原代细胞和各种干细胞,Cas9质粒电转有较大毒性,我们推荐使用RNP进行基因编辑。

原代T细胞不管是未刺激的PBMC或者刺激培养的T细胞都可以使用RNP进行高效基因编辑,只要调节各自所需的电压就可以。PBMC直接做基因编辑,需要使用PBMC模式,使用较高的电压。而刺激2-3天的T细胞在细胞系模式下用较低电压就可以电转RNP。比如TCR敲除的实验,我们使用2-3天刺激培养的T细胞,可以达到92%的CD3敲除效率,细胞生长状态和未电转的对照细胞相似。

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T细胞、NK细胞和造血干细胞的基因编辑在基因治疗领域比较重要,我们有成熟的方案可以帮助您快速完成实验。另外,我们也有单次电转10ml的大体积电转仪可以单次处理10E9量级的细胞。

对于iPSC细胞,电转RNP也是使用细胞系模式,简单调节电压就可以达到高效率。比如在AAVS1和OCT4基因位点上,使用RNP电转可以达到较高的敲除效率。如果需要进一步提高敲除效率,可以使用较高浓度的RNP,比如在20ul电击管里面使用10ug的Cas9蛋白和5ug的gRNA

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使用质粒电转进行基因编辑,适合于普通细胞系。带Cas9基因和gRNA的质粒一般分子量比较大,电转时具有一定的毒性,但是细胞系生长速度快可以承受。由于质粒进行基因编辑效率比RNP低,一般需要进行加药筛选,提高基因编辑的效率。加药筛选有两种方案,一种是常规的长时间筛选,得到的细胞会稳定表达Cas9蛋白和gRNA,同时带有编辑的基因。THP-1细胞使用我们的辅助试剂电转Cas9-gRNA-GFP-Puro质粒后,经过长期筛选可以得到全部GFP阳性的细胞,这些细胞的基因编辑也已经大部分完成 。
基因编辑插图2

使用质粒电转的方法做基因编辑一般需要时间比较长。由于Celetrix电转效率高并且细胞存活率高,我们有另一种特殊的快速筛选方法在质粒瞬转阶段完成高效基因编辑。得到的细胞带有高效基因编辑,并且不带质粒上的gRNA和筛选标记,方便进行另一个基因的编辑。