Celetrix Electroporation

全新高效细胞电转仪

PBMC细胞电转(原代T细胞电转)

在电转条件上,外周血分离的PBMC,纯化的T细胞和纯化的NK细胞都比较类似。这些细胞在未刺激培养时,直径比较小,只有7-8um,电转需要的电压比普通细胞系高很多。

新型号的LE+/EX+仪器有专门的PBMC模式。只需要根据以下推荐的参数调节电压即可。PBMC模式只适用20ul和100ul的电击管,加样后可以室温直接电转。采用高密度细胞电转,100ul可以最多处理1*10E8的PBMC细胞。细胞密度越高,所需要的电压越高。

PBMC模式-细胞电转推荐参数

  细胞量:2-10*10^6细胞/20ul;1-5*10^7细胞/100ul

  质粒量:20ul:2ug;100ul:10ug(试剂盒纯化)

  电转液:Celetrix专用电转液

  电转后培养液: 无抗生素培养液+antiCD3/antiCD28/IL2

  电转条件:1300V-1450V 

电转PBMC也可以冰上操作,适合LE/EX仪器型号。该模式下需要提将样品彻底冷却到4℃。电转前的细胞、电转液和电击管都可以置于室温,加样到电击管后,将整个电击管直立完全插入冰中并且在电击管上面也放有冰粒,等待5-6分钟后马上电转。设置脉冲时间为20ms,电压根据电击管型号设定。

20ul:830-880V 20ms (5-6分钟冷却)
100ul:840-900V 20ms (5-6分钟冷却)
120ul: 1230-1300V 20ms (5-6分钟冷却)
600ul: 1350-1450V 20ms (7-8分钟冷却) (EX/EX+)